一种诱导牙髓干细胞神经向分化的有效方法和诱导时间的探索

摘要

目的 建立一种简单而高效的诱导牙髓干细胞(DPSC)向神经向分化的方法。方法 使用酶消化法分离原代DPSC,通过流式细胞术表征表面标志物以及三系诱导分化鉴定其多向分化潜力。添加20 ng/mL bFGF和20 ng/mL EGF的单层培养方法诱导DPSC向神经向分化,通过Western Blot、q-PCR检测神经相关标志物随诱导时间增加发生的改变,通过免疫荧光染色检测表面标志物改变。通过止血钳夹闭的方式构建大鼠坐骨神经损伤模型,胰酶消化收集诱导6d的dDPSC,注射到损伤处,4周后通过HE染色和免疫荧光染色检测神经修复情况。结果 获取的DPSC经流式细胞术、三系诱导分化鉴定,符合间充质干细胞特征。Western Blot、q-PCR结果表明Nestin、GFAP随诱导时间增加而上升,在6~9 d趋于稳定。细胞免疫荧光染色结果显示dDPSC的CD73、CD146表达下降,而Nestin、GFAP的表达升高。HE染色显示,PBS组的坐骨神经损伤严重,发生神经变性,而dDPSC组的神经组织结构与对照组类似。NF200/S100β的免疫荧光染色结果显示dDPSC组轴突和髓鞘再生情况优于PBS组。结论 酶消化法分离得到的DPSC纯度良好,通过添加20 ng/mL bFGF和20 ng/mL EGF培养的单层培养法培养6 d可以诱导DPSC向神经前体细胞分化,dDPSC对大鼠坐骨神经损伤的恢复有一定的促进作用。