TGF-β1/Smad3信号通路调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究

摘要

目的:研究TGF-β1/Smad3信号通路对调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的影响.方法:首先利用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对小鼠Amelotin启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(ChIP)方法观察Smad3与 Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用;最后利用基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析 TGF-β1和Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响.结果:TGF-β1和Smad3作用于成釉细胞后,Amelotin启动子转录活性明显增强(P<0.05);Smad3与Amelotin基因启动子的"AGAC"及"GTCT"序列有相互作用;将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列突变为"TGTC"和"GACA"后,TGF - β1和Smad3对突变型Amelotin基因启动子转录活性的影响较野生型明显减弱(P<0.05).结论:TGF-β1/Smad3信号通路通过作用于Smad3结合位点调控成釉细胞Amelotin基因启动子的转录活性.