基于miR-34a/SIRT1轴研究柚皮素对H_(2)O_(2)诱导的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

摘要

目的基于miR-34a/沉默信息调节因子1(SIRT1)轴探讨柚皮素对H_(2)O_(2)诱导的人视网膜色素上皮细胞(RPE)氧化损伤的保护作用。方法MTT法检测不同浓度的柚皮素对H_(2)O_(2)诱导的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19存活率的影响以选取适宜柚皮素浓度为后续实验浓度。取对数期生长的ARPE-19细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组(200μmol/L)、20μg/mL柚皮素组、20μg/mL柚皮素+mimics NC组、20μg/mL柚皮素+miR-34a mimics组。采用RT-qPCR检测细胞中miR-34a和SIRT1 mRNA的表达,MTT法及Annexin V-FITC/PI双染分别检测细胞存活与凋亡情况,荧光探针检测细胞内ROS水平,生化法检测SOD活性、MDA和GSH水平,并采用JC-1法检测线粒体膜电位(MMP),Western blot检测SIRT1及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果与对照组相比,H_(2)O_(2)组ARPE-19细胞中miR-34a表达、ARPE-19细胞凋亡率、ROS、MDA含量、Bax和Caspase-3表达显著升高(P<0.05),SIRT1 mRNA表达、ARPE-19细胞存活率、SOD、GSH含量、MMP水平、SIRT1和Bcl-2表达显著降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)相比,柚皮素可改善H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞损伤,下调miR-34a表达,降低ROS、MDA、Bax和Caspase-3含量(P<0.05),上调SIRT1、MMP、Bcl-2表达,增加GSH、SOD活性(P<0.05);上调ARPE-19细胞miR-34a的表达,可逆转柚皮素对H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞氧化损伤的保护作用。结论柚皮素可能通过下调miR-34a,促进SIRT1的表达,抑制RPE细胞凋亡,保护H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞氧化损伤。