小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型标准化血清制备及ELISA检测方法的建立

摘要

目的 制备标准化小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型(reovirus 3,Reo-3)免疫血清,建立小鼠Reo-3抗体ELISA检测方法.方法 使用动物来源的Reo-3病毒感染BALB/c小鼠,获得高效价免疫血清;以BHK-21细胞制备Reo-3病毒抗原,同时制备做正常对照抗原.滴定抗原和标准化小鼠Ran一3血清的最佳工作浓度,进行特异性、敏感性、重复性、稳定性等实验.结果 制备18 mL抗Reo-3血清,经检测,IFA效价达1:640,IEA效价达1:160;Reo-3抗原和标准化小鼠Reo-3免疫血清最佳工作浓度分别为5 μg/mL和1:2400;该ELISA检测体系Reo-3特异抗原批内变异系数为3.8%,批间变异系数为4.0%;检测灵敏度＞0:4400;与仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠腺病毒(Mad)、小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)、小鼠多瘤病毒(POLY)均无交叉反应.经37℃破坏性试验,2 d稳定性试验相对偏差＜27%.结论 本研究制备的Reo-3抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为检测实验小鼠Reo-3病原的标准化质控血清.本研究建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.该体系可用于大、小鼠等实验动物Reo-3抗体的检测.