微小RNA-135b-5p调控子宫内膜癌细胞对顺铂耐药性的机制研究

摘要

目的探讨微小RNA-135b-5p(miR-135b-5p)通过靶向下调RECK(reversion inducing cysteine rich protein with Kazal motifs)促进子宫内膜癌(EC)顺铂耐药性的分子机制。方法用顺铂处理Ishikawa细胞建立顺铂耐药Ishikawa/CDDP细胞,将细胞分为4组:空白组、第1转染组、第2转染组以及第3转染组。第1转染组不做任何处理,第2转染组、第3转染组以及第4转染组在细胞中分别转染miR-135b-5p mimics、pcDNA-RECK和miR-135b-5p mimics+pcDNA-RECK。用实时荧光定量聚合酶链反应法检测顺铂敏感性和耐药性患者组织中以及Ishikawa和Ishikawa/CDDP细胞中miR-135b-5p的表达情况;蛋白质印迹法检测RECK蛋白的表达;克隆形成实验检测细胞增殖情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果空白组和第1转染组中miR-135b-5p的表达分别为1.02±0.09,1.54±0.11;这2组的克隆形成结果分别为50.52±9.21,137.65±13.45;这2组的迁移数分别为53±11,207±21;这2组的侵袭数分别为58±18,215±20;这2组的RECK的表达分别为1.05±0.12,0.47±0.09,组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白组、第2转染组和第3转染组的RECK表达分别为1.08±0.11,1.49±0.09和1.09±0.10;这3组的克隆形成结果分别为148.32±15.11,75.64±10.21和125.64±11.41;这3组的迁移数分别为198±21,79±13和167±20;这3组的侵袭数分别为196±20,83±16和162±18。上述指标:第2转染组与空白组比较或第3转染组与第2转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论miR-135b-5p在Ishikawa/CDDP细胞中高表达,miR-135b-5p能够通过抑制RECK表达促进EC顺铂耐药。