人血管内皮生长因子C基因真核表达载体的构建及鉴定

摘要

目的:克隆血管内皮生长因子C(Vascular Endothelial Growth Factor C)功能片段的cDNA,构建人VEGF-C基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C在宫颈癌中表达的意义及在淋巴管生长及转移中的作用.方法:根据人VEGF-C cDNA序列,设计合成二对特异性引物,第一对5'端含有EcoR Ⅰ及第二对3'端含有Xho Ⅰ酶切位点.运用RT-PCR法克隆人MDA-MB231中的VEGF-C cDNA部分编码序列(CDS);经双酶切后将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒在处于感受态的大肠杆菌DH5α中扩增,纯化.通过PCR和双酶切鉴定阳性重组子及进行基因序列的测定.结果:用RT-PCR克隆到VEGF-C cDNA部分CDS;PCR和双酶切鉴定阳性重组子,显示有人VEGF-C cDNA编码序列,基因序列测定显示重组质粒上插入的人VEGF-C序列正确.结论:从富含VEGF-C的人MDA-MB231细胞系中克隆得到的VEGF-C基因功能片段cDNA,成功构建了人真核表达载体pcDNA3.1(+)/VEGF-C.