外源性热休克蛋白70基因对心肌细胞损伤的保护作用

摘要

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)基因转染对心肌细胞急性实验性缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制.方法:进行大鼠乳鼠原代心肌细胞培养,随机分为4组,对照组、缺氧/复氧(A/R)组、热休克处理后缺氧/复氧(A/R +HS)组和pCDNA HSP70质粒转导后缺氧/复氧(A/R +pCDNA HSP70)组.用脂质体包裹pCDNA HSP70质粒,并转导入心肌细胞内.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70 mRNA表达,Western blot检测HSP70蛋白表达.以心肌细胞存活率(MTT法)、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌细胞超微结构改变(透射电镜)及Ca2+负荷来检测心肌细胞损伤程度.结果:与A/R组相比,A/R +HS组和A/R +pCDNA HSP70组细胞存活率显著提高;LDH活性明显降低;细胞超微结构明显改善;心肌细胞Ca2+ 负荷明显减轻.A/R组HSP70 mRNA和蛋白含量均较A/R +HS组和A/R +pCDNA HSP70组显著减低( P<0.01),而A/R +pCDNA HSP70组的含量与A/R +HS组相比显著增多( P<0.01).结论:通过基因转染使HSP70基因高表达能对抗缺氧/复氧对心肌细胞的损伤,这一作用与其能抗细胞Ca2+负荷有关.