PCR-RFLP法检测肿瘤坏死因子受体基因多态性

摘要

目的建立聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP) 检测肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNF R2)第6外显子基因多态性的方法.方法用碘化钾法从外周血白细胞中提取基因组DNA,PCR扩增其TNF R2包括编码196位氨基酸残基在内的第6外显子基因,扩增产物用限制性内切酶NIa Ⅲ酶切后干含溴化乙锭的35 g/L琼脂糖凝胶中电泳,紫外灯下直接观察 TNF R2的基因型.结果通过观察电泳条带可确定TNF R2的三种基因型,196R/R纯合子、196M/M纯合子、196M/R杂合子分别出现一、二、三条条带;江苏地区健康汉族人TNF R2第6外显子各基因型的频率为:196M/M 61.6%,196R/R 5.6%,196M/R 32.8%;等位基因的频率为196M 77 .9%,196R 22.1%.结论 RCR-RFLP是一种高效敏感、简单快速、准确可靠的分析TNF R2基因多态性的方法,适于普通实验室开展.