双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌烯醇化酶抗体

摘要

目的 建立检测抗念珠菌烯醇化酶(Eno)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,并进行临床应用评价.方法 用基因工程制备的重组Eno作为包被抗原和酶标抗原,通过棋盘滴定法对双抗原夹心ELISA法的反应条件进行优化,对方法的敏感性、特异性和精密度进行考察.用双抗原夹心ELISA法测定291例住院患者(侵袭性念珠菌病114例,念珠菌定植82例,细菌感染患者95例)以及200名健康人血清,并与本实验室前期自建的间接ELISA法检测抗Eno抗体的结果进行比较.结果 双抗原夹心ELISA法工作条件为:Eno抗原包被浓度为0.5 μg/mL,酶标抗原1∶4000稀释;封闭液为含50 g/L脱脂奶粉的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100.患者血清检测结果显示,批内变异系数(CV)分别为6.8％、7.4％和5.9％;不同批次重复测定15次,其批间CV分别为10.1％、9.6％和12.4％.重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为92.2％.通过ROC曲线确定cut off值吸光度(A)为0.209.检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)的敏感性和特异性分别为81.6％ (93/114)和94.4％ (356/377),敏感性高于检测抗Eno抗体的间接ELISA法(81.6％ vs 76.1％).结论 建立了双抗原夹心ELISA法检测抗念珠菌Eno特异性抗体,可提高IC的诊断率,具有临床应用价值.