外泌体介导miR-106 a靶向Smad7调控间皮细胞MMT对胃癌腹膜转移的影响

摘要

目的 探讨肿瘤源性外泌体(tumor-derived exosomes,TDEs)通过miR-106a-Smad7调控间皮细胞间质性转化(mesotheli-al-to-mesenchymal transition,MMT)影响胃癌腹膜转移的机制.方法 人胃癌细胞系AGS分离外泌体,转染miR-106a mimic,与人腹膜间皮细胞HMrSV5共培养,EdU检测HMrSV5细胞增殖活力,Western blot法检测Smad7、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达.给予TGF-β抑制剂GW788388,EdU检测HMrSV5细胞增殖变化,Western blot法检测SMA、Fibronectin表达.给予Smad7过表达质粒,Western blot法检测MMT相关蛋白表达,Transwell实验检测HMrSV5迁移能力.结果 AGS外泌体与HMrSV5共培养后,HMrSV5增殖活力下降,合并miR-106a mimic处理后,HMrSV5增殖活力进一步下降.Western blot显示,外泌体处理后Smad7表达下降,合并miR-106a mimic处理后,Smad7表达进一步下降;与此同时,E-cadherin表达下降,N-cadherin表达升高.TGF-β干预后,EdU检测显示HMrSV5细胞增殖活力下降,但给予GW788388后,HMrSV5细胞增殖活力有所恢复,Western blot显示TGF-β干预后SMA、Fibronectin表达升高,但给予GW788388后,SMA,Fibronectin表达逆转.给予Smad7过表达,Western blot显示SMA、Fibronectin表达下降,Transwell显示HMrSV5迁移能力下降(P<0.001).结论 胃癌细胞外泌体影响腹膜转移的机制可能有间皮细胞MMT转化,而间皮细胞MMT转化可能与外泌体介导的miR-106a转运靶向Smad7激活TGF-β信号通路相关.