先天性长QT综合征HERG基因真核表达质粒的构建及体外表达

摘要

目的构建携带HERG目的基因的真核表达重组质粒pcDNA3-HERG,并观察HERG基因在心肌细胞中的表达情况。方法应用基因重组技术,将原核克隆载体pGEM-HERG中HERG基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,以酶切和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定重组质粒pcDNA3-HERG的正确性;以Lipofectamine为介导将重组质粒与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染培养的乳兔心肌细胞,转染48h后荧光显微镜下观察计算转染效率并采用Western Blot和全细胞膜片钳技术检测HERG基因的表达情况。结果酶切和PCR结果均证实pcDNA3-HERG的正确性,以脂质体为介导,其转染心肌细胞的效率为(15.2±2.6)%;Western Blot和膜片钳技术检测到HERG蛋白和HERG通道电流的表达。结论成功构建HERG基因真核表达重组质粒pcDNA3-HERG,转染心肌细胞后可表达有功能的离子通道,为今后研究突变型HERG的功能提供了可行的技术平台。