MiR-495通过下调PCNA抑制人血管内皮细胞增殖的作用研究

摘要

目的探讨microRNA-495（miR-495）对人血管内皮细胞增殖的作用及其分子作用机制。方法选择人脐静脉内皮细胞（HUVECs），利用lipofectamine2000转染试剂，将miR-495mimics（模拟物）或miR-495inhibitors（抑制物）转染HUVECs，分别以mimicscontrol和inhibitorscontrol作为对照。通过MTF实验分析过表达或干扰miR-495对HUVECs细胞增殖的影响，进而通过生物信息学软件预测，双荧光素酶报告基因系统，荧光定量PCR及Westernblot，预测并验证miR-495靶基因，最后通过功能互补实验，观察提高或敲低增殖细胞核抗原（PCNA）表达对HUVECs细胞增殖的影响。结果体外细胞增殖实验发现，过表达miR-495可明显抑制HUVECs细胞的增殖，而干扰miR-495则可促进HUVECs细胞的增殖。PCNA是miR-495的靶基因，过表达miR-495可明显下调HUVECs细胞中PCNAmRNA及蛋白表达水平。功能互补实验显示，敲低PCNA的表达亦可降低HUVECs细胞的增殖，反之促进HUVECs细胞的增殖。结论MiR-495可抑制HUVECs细胞的增殖，其作用机制主要通过下调PCNA的表达而实现。