报告基因在大鼠心肌中表达的放射性自显影

摘要

目的以单纯疱疹病毒1-胸苷激酶（HSV1-tk）为报告基因,以131I标记的氟-碘阿糖基脲嘧啶（FIAU）为报告探针,对转染HSV1-tk基因的大鼠心肌组织行放射性自显影（ARG）研究,以探讨该报告系统用于心脏报告基因显像的可行性,并为显像的最佳病毒滴度和显像时间提供理论基础。方法制作腺病毒（Ad）为载体携带HSV1-tk基因的重组体Ad5-tk及空载病毒（Ad5-null）,SD大鼠心肌内注射Ad5-tk及Ad5-null。根据目的不同进行分组如下:（1）转染报告基因后时间对显像的影响:心肌内转染1×10~8pfu AdS-tk后第1、2、3、5、7天注射131I-FIAU;（2）转染不同病毒滴度对显像的影响:心肌内注射不同滴度的Ad5-tk（5×10~8,1×10~8,5×10~7,1×10~7pfu）,2 d后注射131I-FIAU。对照组均采用注射同体积的Ad5-null。注射131I-FIAU 24 h后断颈法处死大鼠,取出心脏,测量γ计数值,行ARG研究,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）从mRNA水平证实,并对ARG图像和RT-PCR图像行半定量分析。结果 ARG及RT-PCR图像上均可见局部报告基因的表达随感染滴度的增加而增高,随感染时间的延长而降低。半定量分析证实在滴度和时间上RT-PCR及γ计数与放射性自显影呈相关关系:不同滴度Ad5-tk转染大鼠心肌细胞,RT-PCR与ARG相关系数r~2=0.963,P＜0.05,γ计数与ARG相关系数r~2=0.996,P＜0.01;不同时间Ad5-tk转染大鼠心肌细胞,RT-PCR与ARG相关系数r~2=0.950,P＜0.05,γ计数与ARG相关系数r~2=0.980,P＜0.01。结论应用ARG方法证实HSV1-tk为报告基因,FIAU为报告探针的系统可以用于心肌报告基因显像,显像最佳的转染滴度为1×10~8pfu,最佳的显像时间为转染后24～48 h,为在体进行报告基因心脏显像提供了理论基础。