急性冠状动脉综合征患者外周血CD4+T细胞及CD28null/CD28+亚型活化后Kv1.3钾通道的表达和意义

摘要

目的研究急性冠状动脉综合征（ACS）患者外周血中CD4’ T细胞及CD28 nnull/CD28+亚型活化前后Kv1.3钾通道数目的变化以及Kv1.3钾通道阻滞剂对CD4+T细胞活化表达的影响,探讨Kv1.3钾通道在不稳定斑块中的意义。方法用免疫磁珠法分离出27例ACS患者外周血中的CD4+T细胞,其中12例进一步分出亚型CD4+ CD28null和CD4+ CD28+T细胞,采用全细胞膜片钳技术记录细胞活化前及经CD3抗体活化72 h后的Kv1.3钾电流。CD4+T细胞活化时分别加入终浓度为0.1、1、10 nmol/L特异性Kv1.3钾通道阻滞剂rMargatoxin （rMgTX ）,共同培养72 h后用反转录-PCR法检测干扰素-γ、肿瘤坏死因子（TNF）-α及颗粒酶B mRNA的表达。结果活化后CD4+CD4+CD28null、 CD4+CD28+T细胞的Kv1.3钾通道的峰电流均明显增加,细胞平均通道数分别增加约90%、60%、80%[活化前后每个细胞的通道数分别为（402±88）个比（752±275）个、（553±328）个比（874±400）个、（392±133）个比（716±251）个,均P＜0.05]。活化前CD4+ CD28nullT细胞Kv1.3钾通道的平均数目比CD4+ CD28+ T细胞多约40%（P＜0.05）,活化后两者差异无统计学意义（P=0.102 ）。不同浓度的rMgTX均下调CD4+T细胞活化后干扰素-γ、TNF-α、颗粒酶B mRNA的表达,各浓度组间干扰素-γ、TNF-α、颗粒酶B mRNA的表达差异均有统计学意义（均P＜0.01）,浓度越高,各mRNA表达越低。结论ACS患者外周血CD4+T细胞及CD28mull/CD28+亚型活化后Kv1.3钾通道表达增加,特异性Kv1.3通道阻滞剂rMgTX呈浓度依赖性地抑制CD4+T细胞活化时干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B mRNA的表达,提示CD4+T细胞特别是CD4+CD28mullT细胞的Kv1.3钾通道可作为预防动脉粥样斑块不稳定的潜在治疗靶点。