磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在植物雌激素染料木素促进eNOS活性过程中作用的实验研究

摘要

目的探讨磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路在植物雌激素染料木素（genistein）促进内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL,100 mg/L）以及ox-LDL（100 mg/L）加genistein（100nmol/L）分别作用5、10、15、30和60 min的基础上,Greiss反应测定细胞培养上清中一氧化氮（NO）的含量,RT-PCR检测HUVEC eNOS mRNA的表达,Western blot检测HUVEC eNOS蛋白和磷酸化eNOS(Ser1179)的表达水平。Western blot检测PI3K/AKT抑制剂LY294002和NSC154020干预后,genistein对HUVEC磷酸化eNOS(Ser1179)表达的影响。结果 HUVEC经100 nmol/L genistein（5、10、15、30和60 min）处理后,培养液NO浓度和磷酸化eNOS(Ser1179)表达水平均明显高于ox-LDL组（P均＜0.05）,其中genistein 15 min处理组最高,然而eNOS mRNA和非磷酸化eNOS蛋白表达水平与ox-LDL组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。HUVEC经PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002和NSC154020干预后磷酸化eNOS(Ser1179)表达明显低于genistein 15 min处理组（P＜0.05）。结论 genistein对HUVEC NO的诱导作用与其促进eNOS(Ser1179)磷酸化进而提高eNOS活性密切相关,而genistein对磷酸化eNOS(Ser1179)的诱导作用被PI3K/AKT抑制剂LY294002和NSC154020阻断,可见genistein在促进eNOS活性过程中通过PI3K/AKT信号通路发挥重要作用。