CD137分子通过微小RNA-145a-5p调控载脂蛋白E-/-小鼠活化T细胞核因子c1表达

摘要

目的探讨CD137分子信号通路是否通过微小RNA-145a-5p（miR-145a-5p）调控活化T细胞核因子c1（NFATc1）表达。方法选取18只载脂蛋白（Apo）E-/-小鼠,8周龄,颈动脉硅胶圈植入建立模型后,根据随机区组法分为对照组、CD137刺激组和CD137抑制组,每组6只;采用荧光定量PCR（qRT-PCR）检测小鼠颈动脉斑块以及平滑肌细胞中miR-145a-5p含量;免疫荧光检测斑块中NFATc1分布,qRT-PCR、Western blot方法检测小鼠体内、外NFATc1表达。用脂质体转染miR-145a5p的拟似物和抑制物进入血管平滑肌细胞（VSMC）;通过分子克隆技术构建NFATc1真核表达载体p3xFLAG-NFATc1、p3xFLAG-NFATc1-3 UTR。构建双荧光素酶报告载体psicheck2-NFATc1,并通过同源重组法构建psicheck2-NFATc1的突变载体psicheck2-NFATc1-Mut转染细胞后分为正常组和突变组。结果 CD137刺激组ApoE-/-小鼠斑块及VSMC中miR-145a-5p水平明显低于对照组（分别为0.21±0.06比1.00±0.00,P＜0.05;0.22±0.07比0.50±0.12,P＜0.05）,斑块内NFATc1表达高于对照组（P＜0.05）;CD137抑制组ApoE-/-小鼠斑块及VSMC中miR-145a-5p水平低于CD137刺激组（分别为0.74±0.17比0.21±0.06,P＜0.05;0.78±0.12比0.22±0.07,P＜0.05）,而斑块内NFATc1表达高于CD137刺激组（P＜0.05）。miR-145a-5p的拟似物处理组中NFATc1表达低于对照组,而抑制物处理组中NFATc1表达高于对照组（P＜0.05）;p3xFLAG-NFATc1-3UTR过表达组中外源性NFATc1表达低于对照组（P＜0.05）;双荧光素酶实验中,正常组中拟似物处理组荧光水平明显低于对照组（0.56±0.08比1.00±0.00,P＜0.05）,突变组中荧光水平与对照组比较差异无统计学意义。结论 CD137分子能够通过miR-145a-5p调控NFATc1的表达。