降钙素基因相关肽和受体活性修饰蛋白1对血管平滑肌细胞迁移的影响及机制

摘要

目的探讨转染降钙素基因相关肽（CGRP）的骨髓间充质干细胞（MSC）对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移的影响,及活性修饰蛋白1（RAMPl）在其中的作用和机制。方法分离、培养大鼠MSC和VSMC,分别应用携带CGRP和RAMPl的慢病毒载体转染MSC和VSMC,然后将MSC与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的VSMC共培养。实验分为5组:（1）AngⅡ对照组（MSC+VSMC+AngⅡ）;（2）MSCCGRP+组(MSCCGRP++VSMC+AngⅡ);（3）MSCCGRP+RAMP1-组(MSCCGRP++VSMCCGRP1-+AngⅡ);（4）MSCCGRP+RAMP1+组:(MSCCGRP++VSMCCGRP1++AngⅡ);（5）RAMP1+(MSC+VSMCCGRP1++AngⅡ)。应用Transwell实验评价VSMC的迁移能力,Western blot检测蛋白的表达水平。结果 Transwell实验结果显示,MSCCGRP+组VSMC迁移数量[（50.8±2.6）个]少于AngⅡ对照组[（71.4±2.3）个],而多于MSCCGRP+RAMP1+组[（30.4±3.0）个]（P均＜0.05）;MSCCGRP+RAMP1-组VSMC迁移数量[（69.0±5.6）个]多于MSCCGRP+RAMP1+组（P＜0.05）,而与AngⅡ对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RAMP1+组VSMC迁移数量[（71.6±3.4）个]与AngⅡ对照组差异也无统计学意义（P＞0.05）。Western blot结果显示,MSCCGRP+组磷酸化核因子-κB P65（P-P65）蛋白表达水平低于AngⅡ对照组（0.475±0.022比0.642±0.035,P＜0.05）;MSCCGRP+RAMP1-组P-P65蛋白表达水平高于MSCCGRP+RAMP1+组（0.670±0.030比0.373±0.041,P＜0.05）,而与AngⅡ对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RAMP1+组P-P65蛋白表达量（0.643±0.039）与AngⅡ对照组比较差异也无统计学意义（P＞0.05）。结论 RAMP1对CGRP抑制VSMC迁移起促进作用,RAMP1-CGRP通过核因子-κB信号通路抑制VSMC迁移。