脂质体介导bcl-x_L反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的影响

摘要

背景与目的:实验证明bcl-xL在鼻咽癌CNE-2Z细胞中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展中发挥着重要的作用。本研究以脂质体(lipofectin)为载体,将人工合成的bcl-xL反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)片段导入CNE-2Z细胞,拟探讨ASODN对CNE-2Z细胞的影响。方法:以bcl-xL的编码区为靶点,人工合成20个碱基全硫代修饰的反义寡核苷酸,脂质体转染反义寡核苷酸进入CNE-2Z细胞后,用MTT法检测细胞成活率;用琼脂糖凝胶电泳、荧光染色、流式细胞术等方法检测细胞凋亡。结果:MTT结果发现,ASODN在Lip介导下即可显著抑制CNE-2Z细胞株细胞增殖(P<0.01),ASODN对细胞增殖的抑制作用随其浓度增加而增强;ASODN作用细胞36h后,经Hoechst33258/PI双染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩、核断裂;流式细胞仪分析发现在G1峰前出现一个亚二倍体峰即凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳分析可见ASODN/Lip处理组出现明显的“梯状”外观等凋亡特征性改变。结论:ASODN脂质体转染CNE-2Z细胞后可促进CNE-2Z的细胞凋亡;在肿瘤研究中,bcl-xL可作为一个有用的靶基因,为开发鼻咽癌基因治疗药物提供实验依据。