靶向G-四链体配体SYUIQ-5抑制Akt-FOXO3a通路诱导鼻咽癌细胞自噬性死亡

摘要

背景与目的:SYUIQ-5是具有吲哚和喹啉结构的白叶藤碱衍生物,已有报道它能稳定和诱导G-四链体形成,抑制c-myc启动子和端粒酶活性。本实验主要研究SYUIQ-5对鼻咽癌细胞自噬的诱导作用及其机制。方法:用免疫印迹法检测SYUIQ-5处理前后鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和HONE1中微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein1 l ight chain3,LC3)、Akt、p-Akt以及自噬相关基因BNIP3(Bcl-2/adenocarcinoma E1B19KD interacting protein3)和Beclin1的蛋白表达水平。用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测鼻咽癌细胞中LC3和BNIP3的mRNA水平。用siRNA干扰BNIP3,检测BNIP3在SYUIQ-5诱导自噬过程中的作用。用共聚焦免疫荧光法观察FOXO3a的定位。结果:用0.25～2.0μg/mL的SYUIQ-5处理鼻咽癌细胞CNE1、CNE2和HONE148h,其LC3的表达在蛋白和mRNA水平均明显增强,且呈浓度依赖性。SYUIQ-5能显著抑制CNE2细胞的p-Akt水平,总的Akt表达基本无变化。用3μg/mLSYUIQ-5作用CNE2细胞24h后,共聚焦免疫荧光观察可见FOXO3a由细胞浆移位到细胞核。SYUIQ-5处理的鼻咽癌细胞中自噬相关基因BNIP3蛋白显著增加,而Beclin1无明显变化。用siRNA干扰BNIP3表达后,SYUIQ-5诱导的LC3-Ⅱ形成的功能受到抑制。结论:SYUIQ-5可能通过抑制Akt的激活,诱导FOXO3a移位到胞核,从而促进LC3的转录,诱导肿瘤细胞发生自噬性死亡。BNIP3也参与了SYUIQ-5诱导细胞自噬的过程。