p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

摘要

目的:从正常人肝细胞系L02细胞中扩增人的肿瘤抑制基因p14ARF,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响.方法:应用RT-PCR技术,从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出0.4Kb的p14ARFcDNA片段,测序正确后插入真核表达载体pcDNA3上的BamHI和EcoRI位点,命名为pcDNA3ARF.此质粒由脂质体LipofectamineTM介导转染肿瘤细胞Hep2、KB、KB-v200、HepG2、HLE、Huh7以及MCF7和MCF7/ADR,经G418筛选2周后统计形成的集落数.结果:经抗生素G418筛选2周后,发现p53阳性的肿瘤细胞HepG2、Hep2、MCF7形成的集落数较少,分别为59±2.1,60±2.1和66±7.0,占各自对照组的47%,57%,58%;而p53异常的肿瘤细胞KB,HLE,Huh-7,则形成相对较多的集落,分别为91±2.5,48±2.0,41±2.0,占各自对照组的74%,65%,80%,但是二种p53异常的耐药肿瘤细胞株KB-v200和MCF7/ADR,形成的集落数最少,分别为13±2.0和21±1.5,占各自转染空载体pcDNA3的对照组的15%和17%.结论:p14ARF能明显抑制p53阳性肿瘤细胞的生长,具有p53相关性;然而p14ARF对p53阴性的耐药肿瘤细胞却具有强烈的抑制作用,由此提示:p14ARF抑制耐药肿瘤细胞的生长是p53非依赖性的(至少在这两种耐药肿瘤细胞中).