抗VEGF发夹状核酶基因抑制VEGF表达及卵巢癌细胞增殖的实验研究

摘要

背景与目的:研究表明血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在与上皮性卵巢癌有关的血管形成过程中可能发挥着重要作用。目前,核酶策略已成为一种基因治疗的策略,用于阻断肿瘤形成或肿瘤的生长与转移。VEGF在卵巢肿瘤形成中的作用尚不十分清楚。我们试图采用抗VEGF发夹状核酶基因阻断卵巢癌中VEGF的自分泌和/或旁分泌通路,以检测其对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:采用脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染人卵巢癌SKOV3细胞,采用G418筛选获得阳性克隆;RNA斑点杂交检测核酶基因在卵巢癌细胞中的表达;免疫组化、间接免疫荧光染色及流式细胞仪结合免疫荧光检测转染前后卵巢癌细胞中VEGF表达;通过MTT、细胞贴壁克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。结果:与SKOV3细胞相比,转染后的SKOV3-RZ细胞VEGF表达明显降低(P<0.01);细胞生长减慢,细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低犤(12.7±1.4)%和(9.4±2.0)%比(30.1±1.9)%和(24.8±1.5)%,P<0.001犦;G1期细胞显著增多(77.6%比57.9%,P<0.01),S期细胞显著减少(17.0%比29.9%,P<0.01)。结论:抗VEGF发夹状核酶基因可显著抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖;