FuGENE6介导雌激素受体质粒HEGO5转染不同乳腺癌细胞株后受体的表达

摘要

背景及目的:基因转染技术是研究乳腺癌细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)的表达及其作用机制的重要手段.本研究检测不同人类乳腺癌细胞株以FuGENE6试剂为载体进行转染时的转染效率,以及ER质粒HEG05转染后ER的表达情况.方法:不同乳腺癌细胞株先用pEGFP-N1质粒转染,流式细胞术(flow cytometry,FCM)对转染效率进行测定.将转染效率高的细胞株分别再用HEG05转染,用FCM和Western blot方法对ER的表达情况进行检测.结果:乳腺癌细胞株MM-231、MM330、MMl34Ⅵ、MMl75Ⅶ、MMl57、MM361、MM436、MM453、UaCC812、UaCC893、BT-549、BT-20、HBL-100、Hs578t、MCF-7、T-47d、ZR-75-1的转染效率存在很大差异.细胞株HBL-100重复性转染实验的变异系数为5.1.几种转染效率较高的细胞株MCF-7、HBL-100、Hs578t、MM436、MM453和BT-20用HEG05转染后,ER阳性的表达率介于12.9%～54.8%之间,与pEGFP-N1的转染效率相当;不同细胞ER的FCM和Western blot检测结果一致.此外,ER的表达具有一定的细胞周期特异性.结论:FuGENE6试剂介导乳腺癌细胞进行转染时重复性好、结果稳定.HEG05转染后ER的表达情况可分别用Western blot和FCM进行定性、定量检测.