三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞受体型酪氨酸蛋白激酶-丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

摘要

目的了解5,7,4′-三羟基异黄酮（genistein）对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）内受体型酪氨酸蛋白激酶-丝裂原活化蛋白激酶（TPK-MAPK）信号转导通路的影响,探讨genistein抑制瘢痕增生的分子机制。方法体外分离培养HSFb,以不同浓度genistein（25、50、100μmol/L）处理细胞,再加入10μg/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）刺激,用[γ-32P]腺苷三磷酸底物掺入法检测细胞TPK活性;用蛋白质印迹法检测TPK-MAPK通路中主要信号蛋白分子c-Raf、丝裂原激活蛋白激酶激酶（MEK）、细胞外信号调节激酶（ERK）、p38 MAPK、c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化蛋白的表达变化。以二甲亚砜溶剂处理的HSFb为对照组。结果25、50、100μmol/L genistein作用后,HSFb内TPK活性分别为（7.15±0.35）、（5.62±0.88）、（3.17±0.94）×10~5pmol·min-1·mg-1,与对照组（8.92±0.28）×10~5 pmol·min-1·mg-1比较,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;细胞内磷酸化c-Raf、MEK1/2、ERK1/2、p38蛋白的含量均有不同程度降低,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。genistein各剂量组磷酸化JNK蛋白含量与对照组近似。在genistein预处理前提下,加入bFGF刺激的细胞内TPK活性及各信号蛋白的表达亦呈下降趋势。结论genistein可通过抑制细胞受体TPK信号转导途径影响HSFb的增殖与活化,主要信号通路可能为TPK→Raf→MEK→ERK/p38途径。