一氧化氮对HaCaT细胞迁移功能的影响

摘要

目的了解外源性NO对HaCaT细胞迁移功能的影响及其机制。方法以硝普钠作为NO的供体,在HaCaT细胞培养液中加入0.1、1.0、10.0、100.0、1000.0μmol/L硝普钠,分别于划痕0 h（划痕即时）及划痕后6、12、24、48 h观察并计算细胞迁移率。根据该结果筛选出硝普钠最佳作用浓度及作用时间,以此为实验刺激条件,应用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的改变,采用蛋白质印迹法、PCR等方法检测实验组（加入10.0μmol/L硝普钠培养24 h）及阴性对照组整合素β1、RhoA、cdc42、Rac1蛋白及RhoA、cdc42、Rac1 mRNA表达情况。对各实验结果行单因素方差分析和重复测量的方差分析。结果加入硝普钠处理后各浓度组细胞迁移率随划痕时间的延长而逐渐增加。加入10.0μmol/L的硝普钠划痕后6～48 h与划痕0 h比较,差异均有统计学意义（F=31.002,P值均小于0.05）。激光共聚焦显微镜显示,阴性对照组细胞纤毛稀少,胞内应力纤维束纤细,而实验组纤毛明显增多,胞内应力性纤维束增粗。实验组整合素β1蛋白表达水平明显低于阴性对照组（F=8.25,P=0.015）;而RhoA的蛋白表达水平为0.92±0.04,高于阴性对照组的0.64±0.04（F=7.25,P＜0.05）,cdc42、Rac1蛋白表达也高于阴性对照组（F值分别为14.10、6.50,P值均小于0.05）。实验组RhoA、cdc42、Rac1的mRNA水平均高于阴性对照组（F值分别为23.67、10.39、9.52,P值均小于0.05）。结论适宜浓度的外源性NO可促进HaCaT的增殖及迁移,提示其在皮肤创面修复中起重要作用。其机制可能与整合素β1表达下降、细胞骨架的改变有关。