自体脂肪源性间充质干细胞局部移植对兔耳增生性瘢痕形成的影响

摘要

目的探讨兔自体脂肪源性间充质干细胞（ADSC）局部移植对兔耳增生性壤痕形成的影响。方法取6只新西兰大耳白兔腹股沟处脂肪组织,分离ADSC并进行传代培养。取每只兔的第3代ADSC进行以下实验。在每只兔每侧耳腹造成6个直径为6 mm的全层皮肤缺损创面,观察创面上皮化情况及局部组织增生情况,记录创面完全上皮化时间和增生性瘢痕形成时间。选择兔左耳创面为ADSC组,右耳创面为对照组,每组36个创面。于创面完全上皮化后（伤后25 d）,ADSC组创面注射0.2 mL溴脱氧尿苷（BrdU）标记的自体ADSC悬液（浓度为5×10~6个/mL）,对照组创面注射等量PBS。每5天注射1次,共注射3次（后2次注射于创面愈合后形成的瘢痕内）。于第3次注射后5 d分别切取2组增生性瘢痕组织,HE染色观察组织形态,VG染色观察增生性瘢痕中胶原排列情况,荧光显微镜下观察增生性瘢痕中BrdU标记的ADSC分布,ELISA法检测增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1、核心蛋白多糖的蛋白含量,实时荧光定量RT-PCR法检测增生性瘢痕中TGF-β1、核心蛋白多糖的mRNA表达。对数据行配对t检验。结果（1）兔耳创面完全上皮化时间为伤后（20.0±2.0）d,伤后（35.0±2.2）d增生性瘢痕形成。伤后40 d,对照组增生性瘢痕仍维持较明显的增生状态,ADSC组增生性瘢痕体积缩小、变平、质地变软、色泽稍变浅。（2）与对照组比较,ADS(组增生性瘢痕中上皮细胞层数增多,可见上皮脚样及真皮乳突样结构形成,真皮层有核细胞数量明显增多。对照组增生性瘢痕中胶原紧密,排列较紊乱;ADSC组增生性瘢痕中胶原密度较对照组下降,排列较规整。（3）伤后40 d,ADSC组增生性瘢痕中仍可见BrdU标记的ADSC。（4）ADSC组增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1、核心蛋白多糖蛋白含量分别为（1.40±0.04）、（8.18±0.23）μg/L及（25.1±0.7）ng/L、（4.872±0.101）ng/mL,对照组增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1、核心蛋白多糖蛋白含量分别为（2.29±0.05）、（12.20±0.38）μg/L及（37.2±1.1）ng/L、（4.143±0.024）ng/mL。与对照组比较,ADSC组增生性瘢痕中Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白含量明显降低（t值为-33.66-22.84,P值均小于0.001）,核心蛋白多糖蛋白含量明显增高（t=10.41,P＜0.001）。（5）与对照组比较,ADS(组增生性瘢痕中TGF-β1mRNA表达量明显降低（t=4.45,P＜0.01）,核心蛋白多糖的mRNA表达量明显升高（t=5.61,P＜0.01）。结论兔增生性瘢痕形成早期瘢痕内移植自体ADSC可抑制增生性瘢痕的形成,改善创面愈合质量,其机制可能与ADSC下调TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,上调核心蛋白多糖的表达有关。