通过毕赤酵母表达系统获得高纯度的重组人血管内皮生长因子(rhVEGF165)

摘要

血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF 165)是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子,高纯度的VEGF165对于抗肿瘤药物和生物标志物研发检测试剂必不可少.目前关于VEGF165的异源表达方法,纯化步骤多且产物纯度不高.以毕赤酵母表达系统为基础,构建人血管内皮生长因子(VEGF165)多拷贝的表达载体.按照酵母密码子偏好性优化人血管内皮生长因子基因(vegf165)的密码子,在毕赤酵母BBPB表达载体基础上,用Biobrick生物积块的方法,构建以Pgap为启动子的五拷贝rhVEGF 165表达载体,同时添加组氨酸标签.利用His标签和VEGF165自身的肝素结合结构域,仅用两步亲和层析纯化得到纯度高于98％的rhVEGF 165蛋白.rhVEGF165纯化后浓度为0.45 mg/mL,且具有生物学活性.该异源表达策略简化了rhVEGF165的纯化步骤,rhVEGF 165具有天然VEGF165的生物学活性,且纯度达到目前文献报道的最高水平.