非连续多核苷酸定点突变的方法

摘要

以人粒巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭＣＳＦ）、人α８干扰素（ｈＩＦＮα８）和分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的ｃＤＮＡ定点突变为例，建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒ＤＮＡ，先用突变引物延伸单链，然后通过ＰＣＲ扩增得到突变双链ＤＮＡ。用该方法成功地改造了ｈＧＭＣＳＦ基因５′端３６个核苷酸中的９个位点、ＩＦＮα８基因５′端３９个核苷酸中的９个位点和ＰＣＮＡ基因ＳＤ顺序两侧６个和７个核苷酸。与经典的含Ｕ单链寡核苷酸定点突变方法相比，本方法突变效率高，并省去了对突变克隆杂交筛选的操作