rnc基因的高表达及核糖核梅Ⅲ的纯化

摘要

根据大肠杆菌中核糖核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ)含量很低的原因是RNaseⅢ能作用于自身基因(rnc)转录物5'端、负反馈调控其自身合成,设计RNaseⅢ高表达的方案。去除rnc基因5'侧能转录生成可被RNaseⅢ降解的RNA结构的序列,保留整个rnc基因及其5'侧的天然翻译起始序列,将之置于λP_L启动子控制下,所构建的质粒在大肠杆菌中经诱导后高表达出RNase Ⅲ,其含量达细胞总蛋白质量的65%以上,并在菌体内形成包涵体。利用RNaseⅢ溶解度变化的特点,在低温、低盐条件中裂菌,并洗涤沉淀,在室温、高盐条件下溶解、过Q-Sepharose FF柱,获得具有良好活性、电泳纯的RNase Ⅲ,收获量为10—12mg/100ml培养液。同时还发现RNase Ⅲ具有特异性结合ATP的活性。