苋菜凝集素基因的克隆及在转基因烟草中抗蚜性研究

摘要

通过PCR从苋属植物千穗谷(Amaranthushypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜凝集素(AHA)的核基因片段.序列分析结果表明该基因为2453bp,含有一1538bp的内含子和两个分别为212bp和703bp的外显子.采取反向PCR的方法获得仅含该基因的编码区克隆.以此为基础与二元表达载体pBin438构建含内含子与不含内含子AHA基因的植物表达载体pBAHAg和pBAHAc并通过土壤农杆菌介导转化了烟草.转化再生植株的PCR和Southernblot分析表明,AHA基因已整合到烟草的染色体中,有单拷贝和多拷贝的整合.用与AHA蛋白高度同源的ACA蛋白的抗血清进行了免疫斑点(Immunodotblot)检测,结果初步表明转基因烟草有AHA蛋白的表达.虫试结果表明转pBAHAg和pBAHAc烟草对蚜虫的平均抑制率分别达57.2%和48.8%,有的高达90%以上.含内含子和不含内含子的AHA基因在转基因植株中的抗蚜性不同.