转基因烟草

摘要： 研究我国野生葡萄燕山葡萄(Vitis yeshanesis‘Yanshan’)VyUSP1基因在转基因烟草不同逆境下的表达情况,选择从供试材料中克隆所获得的VyUSP1基因,利用重组法构建其载体,并用农杆菌介质为导体转化转基因烟草植株,获得USP转基因烟草植株,然后对转基因烟草植株进行不同逆境处理,并对该基因进行初步的功能研究。结果表明,在不同的逆境条件下,USP转基因烟草均具有一定的抗干旱能力,但是不具备抗寒能力。较高浓度NaCl、甘露醇、PEG-6000以及低温处理会抑制转基因烟草种子的萌发。而在不同浓度NaCl、甘露醇处理下,转基因烟草植株幼苗均比野生型(WT)植株幼苗的表现要好;不同浓度PEG-6000处理对转基因烟草幼苗生长的影响并不明显;但在低温处理条件下,转基因烟草植株幼苗全部死亡。植物在受到外界胁迫时VyUSP1基因的表达会上调,蛋白活性被激活之后,有助于提高植物的抗逆性,增强其环境的适应性,因此USP对逆境胁迫存在一定的抗性。

摘要： AhLOS5基因编码花生ABA生物合成的关键酶钼辅因子硫酸化酶,是ABA途径重要的抗逆基因。为探究AhLOS5基因在植物耐盐方面的功能,本研究以T_(1)代过表达AhLOS5和RNAi转基因烟草株系为研究对象,测定盐胁迫下种子根长、细胞膜完整性、叶绿素含量、抗氧化酶活性、内源ABA和脯氨酸含量等生理生化指标。结果表明,盐胁迫条件下,过表达AhLOS5的转基因烟草植株内源ABA含量显著升高,渗透调节物质含量高,膜脂完整性好,抗氧化酶活性及抗氧化物质含量明显升高,能够明显提高转基因株系的耐盐性。转基因烟草中另外3个抗逆相关基因DREB2B、RD22和P5CS表达量的检测结果表明,过表达AhLOS5转基因烟草获得的耐盐性是由胁迫诱导产生的内源ABA调控的。综上,花生AhLOS5基因可通过调控植物体内ABA合成量提高耐盐性,这对AhLOS5基因在花生抗性育种及品质改良中的应用具有指导意义。

摘要： 【目的】为验证转As6G-FFT烟草的基因功能,筛选稳定遗传的阳性株系材料,以建立基于SYBR Green的实时荧光定量PCR的转基因拷贝数检测方法。【方法】利用PCR检测、实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术及生理指标分析鉴定转As6G-FFT基因阳性烟草植株,并利用基于SYBR Green的实时荧光定量PCR鉴定阳性转基因烟草中As6G-FFT基因的拷贝数。【结果】(1)基于PCR检测,14个转基因烟草叶片均能扩增出目的片段,表明14个株系中均已成功转入目的基因As6G-FFT;(2)14个转基因株系中As6G-FFT基因表达量呈极显著(P<0.01)或极其显著上升(P<0.001),其中6个株系的表达量呈极其显著升高(P<0.001);且其表达量与野生型相比最高提高215.13倍;(3)基于生理指标,测定转As6G-FFT基因烟草的果聚糖含量,发现14个转基因株系中果聚糖含量呈极显著(P<0.01)或极其显著上升(P<0.001),其中13个株系的果聚糖含量极其显著升高(P<0.001);且其果聚糖含量与野生型相比最高提高10.47倍;(4)基于SYBR Green实时荧光定量PCR构建As6G-FFT和Nt ACT基因的标准曲线,分别为y=-0.2907x+3.0145和y=-0.2813x+8.0141,R^(2)均为1;在检测的14个转基因株系中As6G-FFT基因拷贝数为1~3,其中1、2和3拷贝的单株数分别占总数的35.7%、50.0%和14.3%。【结论】本研究从DNA、RNA和生理水平综合进行阳性转基因烟草的鉴定,鉴定结果更为准确。此外,还建立了基于SYBR Green实时荧光定量PCR的转基因烟草中外源As6G-FFT基因拷贝数检测方法,可用于快速、高效地估算转基因烟草中外源基因拷贝数,为后续获得稳定遗传材料提供筛选依据。

摘要： 为进一步探索MYB转录因子在花生花青素积累过程中的调控机理,以花生常规品种鲁花11(绿色叶片)和紫色叶片花生种质056杂交后代为材料,基于绿色和紫色杂交群体数字基因表达谱克隆了AhMYB113基因,利用生物信息学手段进行保守结构域、系统进化树等分析,通过实时荧光定量PCR技术检测在花生中的表达模式,在转基因烟草中进行功能鉴定。结果表明,花生AhMYB113基因的开放阅读框全长864 bp,编码287个氨基酸残基;编码蛋白的N端包含2个高度保守的MYB结构域,属于R2R3-MYB转录因子;与拟南芥、金鱼草、矮牵牛、苹果、葡萄中调控花青素积累的R2R3-MYB聚成一大类;通过荧光定量PCR分析发现,AhMYB113在花生紫色杂交后代(PH、PS)中的表达水平要显著高于绿色杂交后代(GH、GS);在烟草NC89中异位表达AhMYB113,能够促进花青素积累,使得转基因烟草叶片转变为紫色,随着叶龄增长叶片紫色逐渐加深,花瓣、雄蕊(花丝、花药)、雌蕊(柱头、花柱)、萼片等组织也分别呈现为紫红色或紫黑色。

摘要： Dof转录因子参与植物对非生物胁迫应答。本研究对大豆GmDof2.2进行克隆及耐盐性功能鉴定。实时荧光定量PCR结果显示GmDof2.2在大豆幼苗中可以响应非生物胁迫,GmDof2.2基因开放阅读框全长867 bp,编码288个氨基酸的蛋白,其分子量31.4 kDa,等电点10.23,蛋白质序列中含有一个保守的Dof结构域。GmDof2.2启动子区含有3种胁迫响应相关的顺式作用元件(ARE、MBS和WUN-motif)和3种激素响应相关顺式作用元件(ABRE、P-box和TCA-element)。将GmDof2.2构建植物表达载体并转化烟草,共获得4株GmDof2.2异源表达的转基因烟草株系(OE1-OE4),OE1中GmDof2.2的表达量最高,其次为OE2。盐胁迫处理后,转基因烟草萎蔫程度高于野生型烟草,转基因烟草叶片的叶绿素、可溶性糖及脯氨酸含量均显著低于野生型烟草,而丙二醛含量则高于野生型烟草。表明GmDof2.2的异源表达提高了转基因烟草株系对盐胁迫的敏感性。本研究为大豆Dof转录因子抗逆机制研究及应用提供理论依据。

摘要： 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉籽糖系列寡糖(RFO)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用.实时荧光定量RT-PCR结果显示,高温胁迫可以诱导GmGolS2-1在大豆幼苗中的表达.将GmGolS2-1基因构建到植物表达载体pRI101上并通过叶盘法转化烟草,经卡那霉素抗性筛选,PCR及qRT-PCR检测共获得6株阳性转基因烟草植株(OE1～OE6).对野生型烟草植株和GmGolS2-1转基因烟草植株进行高温胁迫处理,结果显示野生型烟草的电解质渗透率和丙二醛含量均高于转基因烟草.由此推测GmGolS2-1可以提高转基因烟草的耐热性.

摘要： 查尔酮合酶是花色素生物合成过程中的关键酶.为研究玉簪查尔酮合酶基因的结构及功能,基于玉簪转录组数据库信息,利用RT-PCR的方法克隆得到紫萼玉簪查尔酮合酶基因,命名为HvCHS,构建pCAM-BIA3301-HvCHS载体,农杆菌介导法转化烟草,验证HvCHS基因功能.结果表明:HvCHS基因的ORF全长1 176 bp,编码391个氨基酸,分子质量为42.798 kD,等电点为6.48,是亲水性的同源二聚体蛋白;预测亚细胞定位于细胞质中,与大花君子兰Clivia miniata(ARI70436.1)、水仙Narcissus tazetta var.chinensis(AFM36770.1)的同源性较高;转基因烟草的花瓣中花色苷含量明显高于野生型烟草,说明HvCHS基因的过表达能够促进花色苷积累.

摘要： 糖转运蛋白(sugars will eventually be exported transporters,SWEETs)广泛存在于真核生物中,在植物糖类的长距离转运、激素转运、花粉发育、果实形成、种子灌浆及植物-病原体互作等生理过程中发挥重要作用.为解析StSWEET16b基因在糖的转运及病原菌互作中的功能,本研究以马铃薯(Solanum tuberosum)'青薯9号'为材料,采用qRT-PCR技术分析了该基因在不同糖处理下的表达规律,结果发现,StSWEET16b在3％的蔗糖、果糖和葡萄糖分别处理下表达模式均发生变化,表明该基因在马铃薯中可能同时参与蔗糖、果糖及葡萄糖的转运.通过分析转基因烟草(Nicotiana tabacum)在不同糖培养基上的生长状况,并测定植株体内蔗糖、果糖及葡萄糖的含量发现,在葡萄糖和蔗糖培养基上,转基因烟草的长势弱于野生型植株,并且转基因植株中的蔗糖和葡萄糖含量均低于野生型,而在果糖培养基上,转基因烟草的长势明显优于野生型植株,且转基因植株中的果糖含量高于野生型(P＜0.05),表明在烟草中StSWEET16b的异源表达可促进果糖的转运,同时抑制蔗糖和葡萄糖的转运.瞬时表达结果表明,StSWEET16b基因参与了本氏烟-晚疫病菌之间的互作,抑制了晚疫病菌病斑的扩展,提高了植株的抗病性.研究结果表明,StSWEET16b蛋白在果糖转运和植物-病原病菌互作过程中发挥着重要作用.本研究为马铃薯品质的改良和抗病品种的选育提供理论依据.

摘要： 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyrne A reductase,HMGR)和1-去氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate reductoisomerase,DXR)是萜类生物合成途径的上游关键酶。构建阳春砂AvHMGR和AvDXR1的重组植物表达载体,电击转化农杆菌EHA105,通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,筛选转基因植株,分析目的基因在转基因烟草中的表达情况。对转基因烟草的PCR检测结果证实AvHMGR和AvDXR1已整合到烟草基因组中;半定量RT-PCR检测到目的基因在部分转基因植株的过表达。本文构建成功了过表达阳春砂HMGR及DXR基因的转基因烟草,为在模式植物中分析基因的生物学功能打下基础。

摘要： 以在中药材补骨脂中分离到的一个具有胰蛋白酶抑制剂活性抗菌抗菌蛋白PscAFP为研究对象。根据其N-端氨基酸序列设计简并引物，采用3'RACE和YADE扩增获得Psc-AFP对应编码序列，命名为PscAFP:然后将其在毕赤酵母中表达，并测定了重组PscAFP的抗菌活性;同时构建其植物表达载体，将其在烟草中表达。结果表明:重组PscAFP对烟草赤星病菌抱子萌发有明显的抑制作用，以Phe-Val-Arg·pNA、Boc-Gly-Pro-pNA、BNPNA、BANA为底物，利用胰蛋白酶水解底物实验发现，重组PscAFP对胰蛋白酶活性有明显的抑制作用;通过根癌农杆菌介导对烟草外植体进行遗传转化并获得了转基因再生植株，转基因烟草接种赤星病菌实验表明，转PscAFP烟草对烟草赤星病抗性有显著的提高。

摘要： VHA-c2、VHA-c3和VHA-c5指导GUS基因在转基因烟草组织内的表达表现出一定的组织及发育特异性.其中,VHA-c2、VHA-c3在根中的表达活性较高,且VHA-c2优先在发育中期叶组织、基部茎组织和侧(次生)根中表达;VHA-c3则优先表达于较老叶组织、上部茎组织和主根中.VHA-c5却优先表达于幼嫩叶组织中,而在茎、根组织中的表达较少.

摘要： 本试验在盆栽条件下,以转抗菌蛋白基因(LJAMP2,T-Lj)和转空载体烟草(T-Vi)为试验植株,亲本非转基因烟草(Nt-X)为对照,研究转基因烟草在不同生育期对紫色土根际微生态环境的影响,包括可培养细菌、真菌数量和土壤酶活性.试验结果表明,相对于非转基因的对照处理,转基因(T-Lj、T-Vi)并不影响烟草本身的农艺性状.根际可培养细菌而言,在烟草整个生育周期,T-Lj与T-Vi处理的细菌数量变化趋势与Nt-X一致;但在成熟期,T-Lj和T-Vi处理的细菌CFU显著低于Nt-X.对于根际可培养真菌而言,三种处理的烟草根际真菌数量较稳定,随着烟草的生长,真菌数波动幅度不大,且不同处理间不存在显著性差异.土壤酶活性研究表明,在烟草的生长发育期间,不同处理间根际土壤蛋白酶活性较稳定,且差异不显著;在烟草团棵期,T-Lj处理的脲酶活性显著低于Nt-X;在残茬期T-Vi处理的过氧化氢酶和脲酶活性均显著低于Nt-X.表明转抗菌蛋白基因和转空载质粒基因烟草种植对紫色土土壤过氧化氢酶、脲酶活性具有一定的抑制作用.

摘要： 在0到-4°C范围内,随着温度的降低,转基因植株和对照植株的电导率都随之升高;丙二醛含量变化与植物的抗寒性呈负相关;抗寒性强的品种过氧化物酶活性高于抗寒性差的品种,且随温度下降变幅较缓;生理指标的测定显示转基因烟草的抗寒性高于非转基因烟草的抗寒性.苗期在同样处理条件下,转抗冻基因的材料冻害症状相对较轻,表现出明显的抗冻性;大田期各处理于田间旺长期进行了调查,结果表明部分转化材料与其对照相比在株高上差异显著.

摘要： 在0到-4°C范围内,随着温度的降低,转基因植株和对照植株的电导率都随之升高;丙二醛含量变化与植物的抗寒性呈负相关;抗寒性强的品种过氧化物酶活性高于抗寒性差的品种,且随温度下降变幅较缓;生理指标的测定显示转基因烟草的抗寒性高于非转基因烟草的抗寒性.苗期在同样处理条件下,转抗冻基因的材料冻害症状相对较轻,表现出明显的抗冻性;大田期各处理于田间旺长期进行了调查,结果表明部分转化材料与其对照相比在株高上差异显著.

摘要： 为明确山葡萄VaICE1基因对植物生长发育的影响，构建了山葡萄VaICE1基因的35S强启动子控制的植物表达载体pCAMBIA1300：：VaICE，将其转入烟草中，经PCR和RT-PCR检测，获得转VaICE1基因植株。转基因烟草表型观察表明：T1代转基因株系前期长势旺盛，叶片生长指数呈显著性差异；叶片气孔数量减少，气孔两端无裂刻或少，绒毛变少；转基因植株后期生长出现矮化，节间短缩等现象。

摘要： 转VHA-c-GUS基因烟草在不同植物激素处理后的GUS表达水平表明,VHA-c的表达可被BAP、ABA、SA、GA1+3和IAA等激素类物质调节.其中,VHA-c2可被ABA、SA和BAP促进,被IAA、GA1+3抑制;而VHA-c3则仅被IAA促进,被ABA、SA、BAP和GA1+3抑制表达;VHA-c5可被ABA、SA、GA1+3和IAA促进,被BAP抑制.

摘要： 转VHA-c-GUS基因烟草在不同植物激素处理后的GUS表达水平表明,VHA-c的表达可被BAP、ABA、SA、GA1+3和IAA等激素类物质调节.其中,VHA-c2可被ABA、SA和BAP促进,被IAA、GA1+3抑制;而VHA-c3则仅被IAA促进,被ABA、SA、BAP和GA1+3抑制表达;VHA-c5可被ABA、SA、GA1+3和IAA促进,被BAP抑制.

摘要： 转VHA-c-GUS基因烟草在不同植物激素处理后的GUS表达水平表明,VHA-c的表达可被BAP、ABA、SA、GA1+3和IAA等激素类物质调节.其中,VHA-c2可被ABA、SA和BAP促进,被IAA、GA1+3抑制;而VHA-c3则仅被IAA促进,被ABA、SA、BAP和GA1+3抑制表达;VHA-c5可被ABA、SA、GA1+3和IAA促进,被BAP抑制.

摘要： 本发明提供了一种抗草甘膦基因及其在调控烟草对草甘膦抗性中的应用。所述基因的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。本发明提供了一种转基因抗草甘膦烟草的培育方法，转基因抗草甘膦烟草pLSZ1#1植株达到了同质化，且获得的性状能够稳定的遗传，使用该方法获得的转基因抗草甘膦烟草pLSZ1#1抗性显著提高40倍以上，可以耐受11mmol/L草甘膦。

摘要： 本发明提供多种产生胶原蛋白的植物事件、用于检测植物事件的DNA分子及所述DNA分子在植物育种方法中的用途。

摘要： 本发明提供了一种抗草甘膦基因及其在调控烟草对草甘膦抗性中的应用。所述基因的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。本发明提供了一种转基因抗草甘膦烟草的培育方法，转基因抗草甘膦烟草pLSZ1#1植株达到了同质化，且获得的性状能够稳定的遗传，使用该方法获得的转基因抗草甘膦烟草pLSZ1#1抗性显著提高40倍以上，可以耐受11mmol/L草甘膦。

摘要： 本发明公开了一种赤霉素受体蛋白及其转基因烟草以及在烟草中的应用。本发明提供一种新的编码赤霉素受体蛋白的氨基酸序列，将该编码赤霉素受体蛋白的氨基酸序列整合到烟草中，可在转基因烟草中超量表达赤霉素受体蛋白，有效达到缩短烟草萌发时间、促进烟草植株生长、影响烟草纤维素和木质素合成以及影响烟草内源赤霉素含量等效果。

摘要： 本发明属于植物基因工程技术领域，公开了一种MYB140基因、构建的载体、表达的转基因烟草植株，MYB140基因的序列为SEQ ID NO：1。转基因烟草T1,T2,T4植株中木质素生物合成途径的关键酶基因，包括苯丙氨酸酶(PAL)、肉桂醇脱氢酶(CAD)、肉桂酰‑CoA还原酶(CCR)、儿茶酚‑O‑甲基转移酶(COMT)基因的转录升高；其中CCR基因转录水平升高最多，其表达水平可达野生型植株的67.51倍。结果证明了毛竹MYB140基因对木质素生物合成起正调控作用，其过量表达能通过上调CCR、CAD、COMT、PAL等基因的表达水平，显著提高植物的木质素含量。

摘要： 本发明公开了一种烟草系统素原基因在转基因烟草中的应用，其步骤是：A.通过RT－PCR得到的cDNA序列；B.用T载体的策略将proTobsys克隆；C.BamHI酶切包含有proTobsys的pBS－proTobsys；D.将获得的片段连接到植物表达载体pBIm上，形成可转化载体；E.将制备的载体通过制备的农杆菌感受态转化进入农杆菌，再通过叶盘法导入烟草叶片；F.对转基因烟草进行杂交鉴定，得到proTobsys过量表达的转基因烟草；G.转基因烟草进行棉铃虫取食烟草叶片实验，转基因植物对棉铃虫的抗性提高。分析转基因烟草抗性基因的表达和活性，转基因烟草蛋白酶抑制剂表达和多酚氧化酶活性都提高。

摘要： 本发明公开了一种赤霉素受体蛋白及其转基因烟草以及在烟草中的应用。本发明提供一种新的编码赤霉素受体蛋白的氨基酸序列，将该编码赤霉素受体蛋白的氨基酸序列整合到烟草中，可在转基因烟草中超量表达赤霉素受体蛋白，有效达到缩短烟草萌发时间、促进烟草植株生长、影响烟草纤维素和木质素合成以及影响烟草内源赤霉素含量等效果。

摘要： 本发明公开CGMMV基因介导转基因烟草方法。针对现有技术不能利用重组质粒构建含CGMMV来源基因片段的具有发卡结构的ihpRNAi植物表达载体并能成功获得抗性烟草的方法的缺陷，本发明首先提供重组质粒pHellsgate2‑N及其构建方法。该重组载体是将CGMMV基因片段与干涉载体pHellsgate2进行重组反应构建获得。本发明还由该重组质粒转化得到的烟草干涉表达ihpRNAi载体及其构建方法。发明还提供CGMMV Helicase基因、完整外壳基因在病毒基因介导抗性烟草培育中的应用，以及经筛选得到的目的片段He1、He2、He3。

摘要： 本发明属于植物基因工程技术领域，公开了一种MYB140基因、构建的载体、表达的转基因烟草植株，MYB140基因的序列为SEQ ID NO：1。转基因烟草T1,T2,T4植株中木质素生物合成途径的关键酶基因，包括苯丙氨酸酶(PAL)、肉桂醇脱氢酶(CAD)、肉桂酰‑CoA还原酶(CCR)、儿茶酚‑O‑甲基转移酶(COMT)基因的转录升高；其中CCR基因转录水平升高最多，其表达水平可达野生型植株的67.51倍。结果证明了毛竹MYB140基因对木质素生物合成起正调控作用，其过量表达能通过上调CCR、CAD、COMT、PAL等基因的表达水平，显著提高植物的木质素含量。

摘要： 本发明公开了一种转基因烟草多重荧光PCR基因位点、引物及其检测方法，包括Nr、Btc、CpTI、EPSPS、CMV‑cp、PVY‑cp、TMV‑cp、CMV‑sat、PVY‑nib和TMV‑54D基因的位点、引物、探针。本发明将烟草转基因品系的内源和特定外源基因同时用于设计特异性的引物探针组，各引物探针不会造成相互干扰，仅能对特定目标序列进行扩增并激发荧光信号，对非目标序列无扩增和荧光信号，特异性好，检测灵敏度高。