免疫亲和层析法纯化单链尿激酶型纤溶酶原激活剂

摘要

@@ 尿激酶原( Pro-urokinase, pro-UK),也称单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(Single-chain urokinase-type plasminogen activator,scu-PA),与t-PA一样是第二代溶栓药物.给药时,保持无活性的酶原状态,只激活被纤维蛋白吸附的纤溶酶原,而对游离的纤溶酶原没有作用,即只在血栓表面才能活化转变为双链尿激酶(Two-chain urokinase-type plasminogen activator, tcu-PA或UK),因而具有较高的特异性溶血栓作用[1].尿激酶原在纤溶酶、激肽释放酶或胰蛋白酶等的作用下,Lys158-He159间肽键断裂,整条肽链一分为二,并通过二硫键连接,成为具有酶催化活性的双链尿激酶型纤溶酶原激活剂[2,3],即高分子量尿激酶(HMW-UK),如果加入还原剂如巯基乙醇破坏二硫键,可继续降解为低分子量尿激酶(LMW-UK).由于scu-PA能够选择性地在纤维蛋白表面激活纤溶酶原,可以克服尿激酶使用过程中非特异地激活全身纤溶系统所造成的出血倾向问题,故以scu-PA作为溶栓药更有前途[4-6].目前,我们已构建了高水平表达scu-PA的工程细胞株,并建立了相关的纯化方法,但此纯化工艺比较繁杂,加之单链尿激酶原极不稳定,在纯化过程中易降解为双链尿激酶,最终scu-PA的产率和质量会受到影响.