庚型肝炎病毒E2区cDNA在毕赤酵母中的表达及抗原性鉴定

摘要

利用PCR技术,从含有庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)包膜蛋白E2 cDNA(559bp)的质粒pGEX-E2中,扩增得到能够编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)和GBV-C/HGV包膜蛋白E2的融合基因片段.将此长度为1324bp的DNA片段插入到酵母表达载体pPIC9K中,使之位于α-因子信号肽下游,且与之同框.通过电激转化将构建的重组表达质粒pPIC9K-GST-E2插入到Pichia pastoris GS115菌株染色体中.筛选His+Mut.表型的转化子,震荡培养,用0.5%甲醇诱导表达5d后,在培养液中得到表达的GST-E2融合蛋白.经过表达条件的优化,GST-E2蛋白可占培养液中总蛋白的50%.通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化,GST-E2融合蛋白的纯度可达95%左右.以庚型肝炎病人血清为探针,进行免疫印迹及ELISA实验,结果表明该融合蛋白具有能被庚型肝炎病人血清特异性识别的抗原性.