MUC1/Y特异表位肽在大肠杆菌中的可溶性表达及其抗体的制备

摘要

为获得MUC1/Y的特异表位肽,制备抗体,用PCR扩增其编码序列,克隆到pGEX-2T中,转化DH5α感受态,0.2mmol/L IPTG诱导表达,超声破碎或B-PERTMⅡ试剂处理诱导菌,亲和层析和阴离子交换纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定;免疫家兔制备多抗,初步用于免疫组化分析.结果表明,转化菌经诱导后表达融合蛋白GST-Y30,约占菌体总蛋白的20%,大多以可溶形式存在,与诱导温度无关.免疫家兔获得多抗,效价为1∶320 000,纯化的抗体具有特异性,可识别肿瘤细胞表面的MUC1/Y蛋白.所得蛋白和抗体可用于MUC1/Y的表达特征及其生物学功能研究.