表达鸡白细胞介素2重组鸡痘病毒的构建及其体外表达产物生物活性的检测

摘要

从ConA刺激的鸡脾细胞中扩增出鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因编码区.将该编码区cDNA序列和调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子(PE/L)的基因片段定向克隆到鸡痘病毒转移载体p1175中,获得重组转移载体p1175IL2,然后转染已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF),质粒p1175IL2与wt-FPV基因组DNA发生同源重组,产生了表达ChIL-2的重组鸡痘病毒rFPV-IL2.通过在含X-gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得并纯化重组鸡痘病毒rFPV-IL2.应用XTT/PMS方法检测的rFPV-IL2 (M.O.I 2.0)感染CEF 72小时后细胞上清中表达的重组ChIL-2生物活性,效价为3.6×105u/mL,表明rFPV-IL2能有效地表达ChIL-2.下一步将利用rFPV-IL2在体内表达ChIL-2,研究ChIL-2的免疫增强作用及其作用机理.