K55R与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善

摘要

利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行体外定点突变.构建了K55R与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pA0815-ep8-K55R.将该质粒电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达.实验结果表明:该叠加突变体在毕赤酵母中获得了活性表达,得到表达产物脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS.其表达量为508u/mL.分别约为野生型脂肪酶PEL-GS (627u/mL)的81%,随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS(924u/mL)的55%;其比活力为2309.1u/mg,与随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS和野生型脂肪酶PEL-GS的相仿.叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的最适作用温度为37℃,与野生型脂肪酶PELGS和随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS一致;其Tm值为41.0°C,比野生型脂肪酶PEL-GS提高了2.3℃,比随机突变脂肪酶PEL-ep8-GS提高了0.8℃.表明叠加突变脂肪酶PEL-ep8-K55R-GS的热稳定性有了进一步的提高.