随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善

摘要

利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。