极耐热性β-葡萄糖醛酸酶的高效表达和酶学性质及其应用

摘要

从海栖热袍菌克隆出编码热稳定性β-葡萄糖醛酸酶基因,以热激载体pHsh为表达质粒,在大肠杆菌中得到高效表达.基因表达产物通过一步热处理后,酶纯度迭电泳均一.纯化重组酶酶学性质研究表明,β-葡萄糖醛酸酶的最适反应温度为80℃,最适反应pH为5.0,pH 5.8～8.2之间酶的稳定性较好,80℃的半袁期为2h,SDS-PAGE结果显示分子量为65.9 kD,与理论推算值相吻合.以对硝基苯-β-葡萄糖醛酸苷(pNPG)为底物时,其动力学参数Km值0.18 mmol/L,Vmax值为312 u/mg.初步的应用分析表明,该重组酶能催化甘草酸转化为甘草次酸.