HIV-1 CN54 Pol P51抗原高效表达、纯化、复性及在抗体检测中的应用

摘要

为获得可溶性高纯度HIV-1中国株CN54 Pol P51抗原,将携带CN54 pol p51基因的重组质粒pTHioHisA51转化大肠杆菌BL21 codonplus-RIL,用IPTG进行诱导表达.用Chelating Sepharose FF-Ni亲和层析柱及DEAE SepharoseFast Flow阴离子交换层析柱纯化目的蛋白,采用透析复性法得到可溶性抗原,Western blotting检测目的蛋白.用纯化的P51抗原蛋白标记辣根过氧化物酶及包被酶标板进行双抗原夹心法ELISA检测.结果显示P51以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的50%,经两步层析和透析复性,目的蛋白纯度大于95%.Western blotting和双抗原夹心法ELISA检测均显示了良好的灵敏度和特异性.本研究可以为HIV-1疫苗研究和开发检测试剂提供支持.