玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 nsdAmgh基因阻断突变株的构建

摘要

为研究从玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中克隆到的,与天蓝色链霉菌M 145中的一个重要负调控基因nsdA基因同源的nsdAmgh基因的功能,本文构建了nsdAmgh基因破坏型重组质粒pSRNA2500 (pKC 1139:: 1.5 kbnsdAmgh:: 1.0 kb Kmr),转化ET12567 (pUZ8002)获得接合转移供体菌ET 12567 (pUZ8002,pSRNA2500),通过接合转移将重组质粒导入玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中.在高温和抗生素双重筛选压力下,筛选得到表型为AmsKmr的nsdAmgh基因阻断突变株,通过PCR、 Dot bloting和Southern blotting验证了突变株中的nsdAmgh基因已被正确阻断.与出发菌株相比,突变株在摇瓶水平上对棉花黄萎病菌的抑制能力提高了一倍.