利用Ⅲ型聚酮合酶CsyB起始单元的底物多样性体内合成csypyrone类化合物

摘要

作为新型Ⅲ型聚酮合酶,米曲霉来源的CsyB能够依次接受一个起始单元为短链脂肪酰辅酶A、一个延伸单元为丙二酰辅酶A和另一个延伸单元为乙酰乙酰辅酶A的3个底物形成短链的csypyrone B1-3.基于CsyB的晶体结构分析,显示它的活性中心存在一个长约16(A)的能够接受脂肪酰辅酶A结合通道,这个通道很可能能够接受多种底物.为了检测该酶的底物多样性,将CsyB基因导入到存在长链脂肪酰辅酶A前体的大肠杆菌中表达.高效液相结果显示,相比对照菌株,重组菌株产生了一系列长链的csypyrone衍生物.利用紫外可见光特征吸收值和高分辨液相色谱-质谱联用仪对这些新产物作了初步分析.对3个具有羟基的csypyrone产物的结构进行了核磁共振一维谱和二维谱的详细鉴定,确定了其羟基的位置.上述结果显示,CsyB具有广泛的底物特异性,不但可以接受多种长链饱和或不饱和脂肪酰辅酶A,还可以接受具有羟基修饰的长链脂肪酰辅酶A作为底物.