节杆菌A.pascens DMDC12锰超氧化物歧化酶基因的克隆和表达

摘要

利用PCR技术对自行筛选的高度耐盐节杆菌Arthrobacter pascens DMDC12中的超氧化物歧化酶基因进行克隆,获得了节杆菌A.pascens DMDC12的SOD新基因(GenBank收录号为DQ779150).将该基因与原核表达质粒载体pET-22b(+)连接,构建重组质粒pET-sodAP,将质粒转化至表达宿主菌E.coli BL21(DE3),构建基因工程菌BL21/pET-sodAP.用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组SOD蛋白表达,用酶活和SDS-PAGE分析表达产物,表达产物的相对分子质量为2.4×104,与sodAP推测的长度相同.表达目的蛋白占菌体可溶性蛋白的23%,比酶活达915.07 IU·mg-1,是对照菌株的8.73倍,具有较高的表达.本研究为进一步进行重组Mn-SOD的研究和应用奠定了基础.