载短发夹RNA质粒的阳离子高分子脂质体载体的制备及理化性质的研究

摘要

目的 探索载短发夹RNA(shRNA)质粒的阳离子高分子脂质体(CPL)的制备方法及其理化性质,确定二者耦合的最佳结合比,优化转染方案.方法 构建CPL,并对其进行表征,通过噻唑兰比色法检测CPL对细胞增殖的影响.将CPL与载shRNA质粒耦合,分为空白对照组(不做任何干预)、Lipofectamine2000转染组及不同质量比(1∶0、1∶0.5、1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5、1∶3)的质粒与CPL耦合成pCPL-shRNA组,转染人结肠癌细胞系HCT-116细胞,采用流式细胞仪检测载shRNA质粒的CPL的转染效率.结果 所构建的CPL为近球形、大小较一致、表面较光滑、分散性较好的纳米粒子,平均粒径为(95.58±4.21) nm.随CPL浓度增加,细胞抑制率逐渐升高,两者呈线性相关(R2=0.9851,P＜0.05),IC50=7.605× 10-2 g/L.载shRNA质粒与CPL在最佳结合比为1∶2,转染效率为(28.19±5.38)％,优于转染剂Lipofetamine组(21.33±6.11)％(P＜0.05).结论 构建的载shRNA质粒的CPL是一种较为理想的基因转运载体.