磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂LY294002对结核杆菌低分子多肽抗原激活γδT细胞的影响

摘要

目的 观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002对CD3单克隆抗体(CD3mAb)活化的T细胞及结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)激活γδT细胞的影响,探讨PI3K在CD3 mAb活化的T细胞及Mtb-Ag启动的γδT细胞TCR途径信号转导中作用.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用CD3 mAb、佛波醇酯+离子霉素(PMA+IM)、Mtb-Ag刺激PBMC,采用流式细胞术检测CD3+T细胞和γδT细胞0、6、12、24、48 h和72 h的CD69分子的表达情况.PBMC经LY294002(0、0.4、2、10 μmol/L)处理后再刺激培养,用EIA试剂盒检测CD3 mAb和PMA+IM刺激组CD3+T细胞白细胞介素(IL)-2的含量;经CD3 PE和CD69 FITC、γδ PE和CD69 FITC双染后,检测LY294002对CD3 mAb活化T细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞增殖的影响,并计数培养扩增10 d的细胞数量.结果 用CD3mAb刺激24 h CD3+T细胞和γδT细胞CD69的表达均达高峰(均在56％左右),用PMA+IM刺激6h,均达高峰(均在99％左右),用Mtb-Ag刺激24 h,亦均达高峰,但CD3+T细胞和γδT细胞CD69的表达分别为(16.0±0.0)％和(75.2±0.7)％,3组同时间点CD3+T细胞CD69的表达之间差异均有统计学意义(均P＜0.05),而γδT细胞CD69的表达在PMA+IM刺激组高于CD3 mAb刺激组和Mtb-Ag刺激组(均P＜0.05),后两组差异则没有统计学意义(均P＞0.05).用LY294002终浓度分别为0、0.4、2、10 μmol/L处理的样本,CD3 mAb刺激组CD3+T细胞CD69的表达分别为(52.0±0.5)％、(46.3±0.4)％、(33.2±0.4)％和(19.1±0.0)％;Mtb-Ag刺激组γδT细胞CD69的表达分别为(66.2±0.6)％、(58.4±0.5)％、(38.1±0.3)％和(19.3±0.1)％.0、0.4、2、10 μmol/L LY294002处理CD3+T细胞后,CD3 mAb刺激组IL-2的含量分别为(561.1±86.2)、(477.0±75.5)、(280.3±53.9)、(36.0±8.7) ng/L,PMA+IM刺激组为(1 922.2±371.3)、(1 928.3±381.7)、(1 938.1±262.1)、(1 915.4±201.6)ng/L.CD3+T细胞的总数由培养前的1.5×106分别增殖到(35.6±8.4)×106、(31.1±7.3)×106、(18.7±5.0)×106和(7.0±2.0)×106;γδT细胞的总数由培养前的1.5×106分别增殖到(7.0±1.1)×106、(4.7±1.0)×106、(1.3±0.8)×106和(0.2±0.1)×106.结论 Mtb-Ag可特异性的激活γST细胞,其活化信号转导需通过TCR通路,LY294002对CD3 mAb活化的T细胞及Mtb-Ag启动的γδT细胞具有明显的抑制作用.