新疆甘草DNA片段的克隆、序列分析及其基因组DNA文库的构建

摘要

目的克隆新疆甘草DNA片段,构建新疆甘草基因组DNA文库.方法对新疆产4种甘草进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,回收甘草随机引物s121的PCR产物中500bp左右的带,克隆到pMD18-T载体中,经电泳鉴定后测定序列,进行序列分析.用Sau3AI对所提新疆甘草基因组DNA进行酶切,回收15～23kb之间的酶切产物片段,然后与Lambda vector BamH I Arms进行连接、包装形成文库,计算文库重组噬菌体滴度、包装效率.结果获得了甘草490bp的DNA片段,所建文库的重组噬菌体滴度为3×106pfu/ml、包装效率为6×106重组子/μg载体DNA.结论成功克隆了新疆甘草DNA片段,并构建了基因组DNA文库,为进一步研究奠定了基础.