小干扰RNA沉默信号转导和转录激活因子1对支气管哮喘小鼠气道炎症的调控作用研究

摘要

目的研究信号转导和转录激活因子1(STAT1)在支气管哮喘(简称哮喘)小鼠肺组织的表达,探讨STAT1特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对哮喘小鼠气道炎症的调控作用。方法构建STAT1特异性发夹样RNA干扰重组体质粒,用脂质体转染γ干扰素(IFN-γ)刺激后的人气道上皮细胞(16HBE),检测其干扰活性。24只BALB/c小鼠随机分为PBS组、PG-HK组和STAT1组。用新鲜配制的OVA混悬液(100mg OVA和100mg氢氧化铝干粉加入1ml生理盐水制成)腹腔注射致敏和OVA溶液滴鼻,用已构建好的转染效率较高的STAT1siRNA于第26天至第29天滴入实验组,另两组分别用等容量的生理盐水或随机构成的RNAi片段滴鼻,末次滴鼻后5h处死取支气管肺泡灌洗液计数浸润的细胞数(特别是嗜酸粒细胞)及检测IFN-γ、白介素4(IL-4)的水平,肺组织做免疫组织化学染色及HE切片染色。结果 STAT1靶向RNA干扰重组体成功构建,并能够高效转染人气道上皮细胞。STAT1特异性siRNA真核表达载体可抑制人气道上皮16HBE细胞中STAT1的表达。STAT1siRNA能减轻哮喘小鼠的气道中嗜酸粒细胞浸润并抑制IL-4的表达,肺组织中STAT1蛋白表达减少,而IFN-γ的水平较高。结论 STAT1特异性siRNA能抑制人气道上皮16HBE细胞中STAT1的表达,并能抑制哮喘小鼠的气道炎症反应。