EGR1基因在牛骨骼肌卫星细胞分化不同时期的表达及定位

摘要

目的:研究EGR1基因在牛骨骼肌卫星细胞(MDSCs)分化过程的表达、定位及入核机制.方法:以牛的MDSCs为实验材料,在分化培养基中分别分化培养1d、3d和5d,每组3个重复,检测不同分化时间的MDSCs中EGR1基因的表达和EGR1蛋白的定位情况;采用CRISPRi方法干扰内源EGR1的表达,结合定点突变和激光共聚焦方法初步探索了EGR1蛋白入核的机制.结果:qRT-PCR和Western blot检测结果显示随着分化时间的进行,EGR1基因在转录水平和蛋白水平的表达都显著高于未分化的细胞,并随时间的延长而表达逐渐升高,分化第3日时表达量最高,随后开始下降.免疫荧光检测到EGR1蛋白主要在分化的MDSCs中表达,并随肌管数量增多而表达量增加.共聚焦结果显示随着细胞分化的进行,部分EGR1蛋白转移进入细胞核.定点突变EGR1蛋白S533A后,分化的MDSCs细胞核内没有检测到EGR1蛋白.结论:在牛骨骼肌卫星细胞分化过程中,EGR1基因转录表达水平升高,部分EGR1蛋白转移入细胞核,且EGR1蛋白C端第533位丝氨酸磷酸化是入核所必需的.