亚油酸调控HepG2细胞PAI-1基因表达的机制研究

摘要

目的:探讨亚油酸对HepG2细胞PAI-1基因表达的影响和调控机制.方法:不同浓度亚油酸刺激HepG2细胞,RT-PCR法检测PAI-1 mRNA水平.构建四个含PAI-1启动子序列从-804至+17间系列缺失体片段驱动的荧光素酶报告基因质粒,转染HepG2细胞,初步确定位于PAI-1启动子序列-804至+17之间的Smad3/4结合元件(SBE)具有调控作用,采用重叠PCR法对该元件进行定点突变并构建相应重组质粒,转染HepG2细胞.Western Blot法检测亚油酸诱导下HepG2细胞中Smad3和smad4的蛋白表达水平.结果:①50μmol/L及100μmol/L亚油酸可显著增加PAI-1 mRNA的表达,100 μmol/L亚油酸可明显上调PAI-1的转录活性.②亚油酸诱导下,PAI-1启动子-734/-731处SBE缺失后,PAI-1荧光素酶活性显著降低.③亚油酸可以显著增加HepG2细胞中Smad13和smad4的蛋白表达.结论:亚油酸可从转录水平上调HepG2细胞中PAI-1基因的表达,PAI-1启动子上的Smad3/4结合元件即SBE参与亚油酸对HepG2细胞PAI-1基因的转录调控,这一过程涉及到smads蛋白及其介导的Smad信号转导通路.