PPARα激活物非诺贝特调控HepG2细胞PAI-1基因表达的机制探讨

摘要

目的：探讨PPARα的特异性外源性激活物非诺贝特对人肝瘤细胞HepG2细胞PAI-1基因表达的影响和调控机制。rn 方法：不同浓度非诺贝特刺激HepG2细胞,RT-PCR法检测PAI-1和PPARα mRNA水平。构建四个含PAI-1启动子序列从-804至+17间系列缺失体片段驱动的荧光素酶报告基因质粒,转染HepG2细胞,初步确定位于PAI-1启动子序列-804至+17之间的Smad3/4结合元件(SBE)具有调控作用,采用重叠PCR法对该元件进行定点突变并构建相应重组质粒,转染HepG2细胞。WesternBlot法检测非诺贝特诱导下HepG2细胞中Smad3和Smad4的蛋白表达水平。rn 结论：PPARα的特异性外源性激活物非诺贝特可从转录水平抑制HepG2细胞中PAI-1基因的表达，PPARα与PAI-1启动子上的Smad3/4结合元件即SBE参与非诺贝特对HepG2细胞PAI-1基因的转录调控，这一过程涉及到Smads蛋白及其介导的Smad信号转导通路。