STIM2、TRPC3在人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流和NO生成中的作用

摘要

目的:研究Ca2+感受蛋白基质相互作用分子2(STIM2)及瞬时型感受器电位3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流和NO生成中的作用.方法:①免疫荧光技术检测HUVEC中STIM2和TRPC3的蛋白表达.②利用转染技术将构建的STIM2干扰质粒(STIM2shRNA)和TRPC3干扰质粒(TRPC3shRNA)分别转染入HUVEC,实时定量RT-PCR和Western blot检测STIM2shRNA、TRPC3shRNA转染后的抑制效率.③取2～5代细胞随机分组:实验组(即精胺+Ca2++ shSTIM2-002组和精胺+Ca2++ shTRPC3-004组),其余两组分别为对照组(Control组,即精胺+Ca2+组),空质粒组(Vehicle组,即精胺+Ca2++ Vehicle组),分别将上述4组细胞与CaR激动剂孵育,各组用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步测定[Ca2+]i和NO生成的变化.结果:①免疫荧光技术检测显示STIM2和TRPC3两者均表达于HUVEC胞浆.②实时定量RT-PCR及Western blot检测结果显示:与Control组相比,shSTIM2-002和shTRPC3-004干扰后,STIM2和TRPC3mRNA的表达均明显降低(抑制率分别为88.2％和74.0％,P＜0.05);STIM2和TRPC3蛋白的表达亦明显降低(抑制率分别为79.9％和71.8％)(P＜0.05).③[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值的测定结果显示:与精胺+Ca2+组的[Ca2+]i、NO净荧光强度值相比,精胺+Ca2++ShSTIM2-002组、精胺+Ca2++ ShTRPC3-004组及精胺+Ca2++ Vehicle组均无显著差异(均P＞0.05).结论:STIM2和TRPC3均未单独参与CaR介导的Ca2+内流和NO的生成过程.