谷氨酸受体相互作用蛋白对缺氧缺糖条件下少突胶质前体细胞凋亡的影响

摘要

目的 观察缺氧缺糖条件下谷氨酸(AMPA)受体相互作用蛋白(GRIPs)表达的变化及对少突胶质前体细胞(OPCs)凋亡的影响,探讨GRIPs在AMPA受体兴奋性毒性中的作用.方法 OPCs分为对照组、缺氧缺糖60 min组和缺氧缺糖120 min组,通过实时荧光定量PCR及蛋白印迹法(Western blot)检测缺氧缺糖条件下GRIP1、GRIP2 mRNA和蛋白的表达情况;再次将OPCs分为空白对照组、OPCs+缺氧缺糖组、OPCs+环磷酸腺苷(cAMP)+缺氧缺糖组、OPCs+ cAMP+缺氧缺糖+GRIP1小干扰RNA (siRNA)组、OPCs+ cAMP+缺氧缺糖+ GRIP1 siRNA阴性对照组、OPCs+ cAMP+缺氧缺糖+GRIP2 siRNA组、OPCs+ cAMP+缺氧缺糖+GRIP2 siRNA阴性对照组,TUNEL试剂盒检测各组细胞凋亡情况,Fluo-4荧光探针观察胞内游离钙变化.结果 缺氧缺糖引起OPCs损伤,光学显微镜下显示细胞轮廓不清晰,胞体回缩.缺氧缺糖60 min后GRIP1(1.233 ±0.060比1.003±0.079,P＜0.05)和GRIP2(1.396±0.069比1.001 ±0.037,P＜0.05)表达明显高于对照组,且缺氧缺糖时间越长,GRIP1(1.416±0.064比1.233±0.060,P＜0.01)和GRIP2(1.680±0.018比1.396±0.069,P＜0.01)表达水平越高.RNAi分别下调GRIP1和GRIP2,细胞内游离钙离子水平降低(0.054±0.003比0.074±0.003,P＜0.01;0.060±0.003比0.074±0.003,P＜0.01),细胞凋亡率下降[(20.703±3.882)％比(11.470±1.679)％,P＜0.05;(19.070±1.106)％比(14.448 ±0.849)％,P＜0.01].结论 GRIP1和GRIP2参与缺氧缺糖引起的OPCs损伤,其可能通过调节Ca2+通透性触发AMPA受体介导的兴奋性毒性发挥作用.